DNA / RNA quantification (Abs) 吸收光核酸定量

 

Tecan的專利NanoQuant Plate™（圖2）

 

ASSAY OVERVIEW

Technology

Absorbance吸收光

　　DNA和RNA的定量可以基於260 nm的吸光度進行，這在UV範圍內，對於人眼來說是不可見的（圖1）。Tecan的多模式讀取器提供用於DNA和RNA測量的發射光孔（必須使用石英或UV透明的光孔）。此外，Tecan的專利NanoQuant Plate™（圖2）非常適合較小體積（2 μl）、更高通量（一次16個樣本）和更經濟的DNA/RNA定量。

1 OD260對應於不同濃度，取決於要定量的核酸類型（表1）。

　　通常使用260 nm對280 nm的吸收比率來評估蛋白質溶液的DNA污染，因為蛋白質，特別是芳香族氨基酸，會在280 nm吸收光。一般認為純DNA的比率為，而RNA為1.85。最近，研究人員發現A260/A230比率也提供有關核酸純度的有價值信息。基於吸光度的DNA定量的典型檢測極限通常在每微升低於單位數位的ng/ul範圍。

Alternative取代方法

LifeTechnologies' PicoGreenR and RiboGreenR quantification assays provide a broader dynamic range. (可搭配Tecan螢光偵測機種使用)

 

DNA測量的樣品步驟：

1. 使用用於稀釋DNA的相同緩衝液空白儀器。

2. 取適量的樣品（NanoQuant Plate：2μl，光度計：體積取決於最小/最大填充體積）。

3. 測量OD260和OD280。

4. 如果OD260值大於2，則稀釋樣品。

5. 要計算濃度，將OD260乘以表2中顯示的濃度因子和您的稀釋因子（如果適用）。

6. 通過將OD260值除以OD280值來確定純度。