GeneBLAzer and Tango™ GPCR Assay System

 

ASSAY OVERVIEW

Technology

Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET),Ratiometric

主要應用、原理

　　Life Technologies的GeneBLAzer測試旨在監測基因的激活，包括表面和細胞內報告基因、多種信號轉導途徑、離子通道和其他轉運蛋白。GeneBLAzer測試的基礎是具有β-lactamase（BLA）基因的細胞系，該基因受控於受監測的靶蛋白下游的啟動子之下。

供應商

　　β-lactamase轉染細胞系可以從Life Technologies購買，也可以自行進行轉染。Tango細胞系也基於GeneBLAzer技術，但專門設計用於GPCR激活測試。

機制

　　如圖1所示，在轉染之後，細胞將載入一種由兩個螢光染料（coumarin和fluorescein）組成的工程螢光底物。如果目標蛋白是非活性的，BLA不會被表達，底物分子保持完整。在這種狀態下，激發香豆素會產生FRET到螢光素部分，並發射出綠光。

　　然而，在存在BLA表達的情況下，底物會被切割，導致螢光染料的分離，FRET無法發生。這將導致coumarin發出藍色螢光信號。

 

報告基因測試通常在幾個小時甚至幾天內進行測量。在此期間，微孔板可以在培養箱和讀取器之間穿梭，或者可以使用具有溫度和氣體控制的多模式讀取器，如Infinite 200 PRO或Spark。

替代方案

LiveBLAzer™，這是GeneBLAzer和resazurin的結合。