以Nanoquant作螢光定量

Tecan Infinite® 200 NanoQuant是一個可以一次分析16個2ul的樣品的超微量樣品盤,上面具有16個獨立的樣品槽,每個都含有一對石英,因此它的光徑不會變，所以一生只需要校正一次(具出廠校正證明) ! 只要透過超音波振盪及壓縮空氣吹乾，即可回到符合校正後的狀態；常規是透過70%酒精作使用前清潔。八個一排的配置(共兩排)便於使用八爪分注的客戶,分注兩次即能完成上樣。它能夠搭配Infinite® 200系列微量盤光度計,應用在吸收光與螢光偵測。

透過使用NanoQuant來定量Quant-iT PicoGreen標定的ds DNA,即使樣品量少至17pg dsDNA,也能被偵測的到。這是低於Quant-iT PicoGreen標榜的偵測極限25 pg (當樣品量為200ul時)。

NanoQuant的使用,提升了Quant-iT PicoGreen染劑的偵測極限,著實為一個省時且可靠的偵測方式 !

這是怎麼一回事，請看看下面的測試報告!
Tris/EDTA (TE) buffer : 原始20X稀釋成1X使用,用於稀釋Quant-iT PicoGreen及Lambda DNA standard。

Quant-iT PicoGreen : 使用TE buffer稀釋200x後使用
Lambda DNA standard : 使用TE buffer稀釋,配出Sample1~12(濃度依表1)

微量盤樣品配置:
50 ul Quant-iT PicoGreen + 50 ul Lambda DNA standard = 100 ul
50 ul Quant-iT PicoGreen+ 50 ul TE buffer=100 ul

NanoQuant使用前使用超音波清洗,並以壓縮空氣吹乾。使用i-control依表2作編程

 

NanoQuant樣品配置:

2 ul Quant-iT PicoGreen + 2ul Lambda DNA standard (濃度依表1)= 4 ul

共4 ul混合後,再取2 ul點到NanoQuant樣品槽,每個濃度至少三重覆

搭配Infinite® 200系列微量盤光度計,使用軟體i-control依表2設定,以NanoQuant作螢光偵測

測量結果:

以NanoQuant測量顯示當dsDNA conc.= 0.9~1000ng/ml時的螢光讀值呈現良好線性(圖一)；數據列於表3。

使用濃度250 ng/ml的樣品代表性的DNA濃度，再以PicoGreen作DNA定量螢光讀值計算它的偵測極限(敏感度:

可以得到偵測極限為8.7ng/ml dsDNA,當使用NanoQuant來測,樣品為2ul時,約含17pg dsDNA (表4)

Katy Yang