Alpha – Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay

 FRET equivalent with reduced distance limitations and amplification

機制

　　Alpha是由PerkinElmer發明的一種技術。原理類似於(TR-)FRET，因為Alpha技術也依賴接受者和供體的相互作用來產生信號（見圖1）。但是，與使用簡單的螢光物質不同，這裡使用的是具有化學反應性的珠子，產生信號的化學反應也不同。AlphaScreen®和AlphaLISA®的主要優勢在於互動合作夥伴之間的距離可以達到200納米，而(TR-)FRET只有10納米。此外，還存在一種增強效應，增加了測試的靈敏度。由於發射波長低於激發波長，背景降低。

測試設計

　　AlphaScreen（增強型螢光近場均質測試）是由PerkinElmer開發的一種基於珠子的生物交互作用快速可靠檢測技術。AlphaScreen化學技術使用可以與各種生物相關分子鏈接的供體和接受者珠子。 AlphaScreen供體珠子中含有的酞菁光敏分子在680納米的高能激光光源激發下，將環境氧氣轉化為大量的單氧分子，其半衰期約為4微秒。如果AlphaScreen接受者珠子接近供體珠子，由於它們耦合夥伴之間的生物結合事件，單氧分子能夠在其半衰期內達到最多200納米的距離。如果AlphaScreen接受者珠子接近供體珠子，由於它們耦合夥伴之間的生物結合事件，單氧分子能夠在其半衰期內達到最多200納米的距離，最終產生一個在520-620納米範圍內的強烈光發射。由於信號生成得到增強，即使可以檢測到少量生物分析物。

　　AlphaLISA是PerkinElmer的基於珠子的Alpha（增強型螢光近場均質測試）技術的無洗法替代方案，可設置為夾心或競爭免疫測試，用於檢測和定量生物樣本中的感興趣分子。AlphaLISA供體珠子內的光敏分子在680納米的高能激發下，將環境氧氣轉化為單氧，如果AlphaLISA接受者珠子接近供體珠子，它們能夠以同伴提供的化學品反應，產生615納米的強烈輸出信號，表明兩種珠子類型所附加的分子之間發生了特定的結合。

與用於經典AlphaScreen測試的接受者珠子相比，AlphaLISA接受者珠子中嵌入的螢光物質產生的波段較窄。這使AlphaLISA不太容易受到小於600納米波長處的信號干擾，提高了測試的靈敏度和穩健性。這種無洗法測試的特性使其易於使用，而使用專用的AlphaLISA光學允許分析血液和血清中的靶分子，從而大大減小了樣本中血紅素的影響。

Alpha技術的多功能性提供了測試許多生物靶標的可能性，包括酶、受體-配體相互作用、低親和力相互作用、第二信使水平、DNA、RNA、蛋白質、蛋白質-蛋白質相互作用、肽、糖和小分子。

Major applications

• AlphaScreen / AlphaLISA