Nucleotide (ADP, GDP, etc.) detection assay
ASSAY OVERVIEW
Technology
Fluorescence polarization (FP)
Fluorescence intensity (FI)
Time-resolved fluorescence resonance energy transfer(TR-FRET)
原理、供應商
Bellbrook的Transcreener測試37旨在使用FP、TR-FRET或FI檢測模式檢測各種單核苷酸和雙核苷酸。四種測試(表1)涵蓋了成千上萬種目標酶,包括任何激酶、ATPase或GTPase。Transcreener是一種通用的測試方法,可用於整個核苷酸依賴酶家族。所有測試都基於對特定核苷酸具有高親和力的不同抗體(見圖1)。
機制
所有Transcreener測試的機制都相同。抗體預先載有相應的核苷酸,該核苷酸與示踪分子偶聯。所有測試使用一種遠紅色示踪劑,以最小化化合物干擾。例如,在ADP²
FP測試中,檢測混合物包括Alexa
633 ADP和高度選擇性的ADP單克隆抗體。
Transcreener ADP2 FP測試通過用ADP取代示踪劑,從而引起螢光偏振減少,來測量任何生成ADP的酶的進展。(見圖2)
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