LanthaScreen™ Kinase Activity Assays

Kinase activity assay with TR-FRET readout

ASSAY OVERVIEW

Technology

Time-Resolved Fluorescence Resonance Energy Transfer (TR-FRET), ratiometric

原理，供應商，主要應用

　　LanthaScreen是由Life Technologies提供的一種檢測激酶活性的檢測方法。激酶是重要的細胞酶，其主要功能是將磷酸基團添加到肽底物中。對於研究人員來說，重要的是要知道在特定抑制劑存在的情況下激酶的活性有多高。LanthaScreen通過測量磷酸化底物的量來量化激酶活性。

格式

　　Life Technologies提供了一系列標記有螢光素的底物以及相應的標誌有鑭元的抗體，專門用於檢測磷酸化底物。

機制

　　將激酶和標有螢光素的底物孵育以進行磷酸化。孵育後，將標記有鑭元的抗體添加到反應中（圖1）。

 

情境1 – 激酶處於活躍狀態

底物已被磷酸化，使磷酸基團特異性抗體能夠結合。螢光素和鑭元標誌現在處於緊密鄰近，導致高的FRET信號。

 

情境2 – 激酶處於非活躍狀態

未發生磷酸化，因此抗體無法結合到底物。FRET無法發生。最終結果是一個無維度的數字，計算為受體（螢光素）信號與供體（鑭元）信號的比率。