Binding assay for biomolecules
TECHNOLOGY技術
螢光各向異性通常被俗稱為螢光極化。在極化光激發下，許多樣本的發射也是極化的。受激發分子的旋轉運動會破壞這種相關性。剩餘的極化程度取決於所測分子的大小：分子越大，旋轉越慢，原始極化的保留度就越高。其他影響因素包括溶劑黏度、溫度和受激態壽命。
下面的隱喻是解釋螢光各向異性的簡單方式。想象一個小孩在草地上玩耍。只要它自由，它可以在任何方向上盡情轉動。一旦它“依偎”在母親的手中，它的動作會減慢並變得有方向。這個比喻可以用來展示螢光各向異性是如何檢測分子相互作用的（圖1）。小孩代表較小的相互作用夥伴，母親代表較大的相互作用夥伴。一個螢光探針附著在小分子上以觀察旋轉和扭轉運動。只要小分子和大分子之間沒有相互作用，螢光團的旋轉速度很快，發射光失去了極化。一旦它與較大的相互作用夥伴結合，它的運動將減慢，發射的光將保留更多原始的極化。
實驗設計
螢光各向異性的一個主要應用是檢測分子相互作用。螢光各向異性實驗需要相互作用夥伴具有不同的大小，並且較小的分子被標記為螢光物質。商業實驗通常提供這些標記的夥伴或底物。最終的結果是測定添加疑似相互作用夥伴前後的極化值的比率。極化是使用下面給出的方程來計算的，該方程測量垂直和平行平面中發射光的強度。
極化的變化提供了有關相互作用的形成和其強度的信息。更高的mP（毫極化）值表示兩種分子之間的相互作用更強。
Major applications
• PolarScreen™ Assays
• TranscreenerR Assays
• Predictor™ hERG assay
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